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 抗體制備流程

項目名稱

委托單位

課題老師

項目負責人

立項時間

結題時間

 

 

 

 

 

 

項目基本要求

1、成功制備重組蛋白,純度>90%。

2、篩選獲取單克隆抗體,2-5株。

 

步驟

內(nèi)容

周期

項目流程

第1步

  1. 委托生工生物合成基因
  2. 引物設計與合成
  3. 質粒擴增和菌種凍存

約2周

第2步

  1. 基因擴增
  2. 全長蛋白表達載體構建
  3. 片段蛋白表達載體構建
  4. 菌株鑒定和保存

1-2周

第3步

  1. 初步評估不同載體的表達情況
  2. 優(yōu)選符合要求的載體做小試驗證
  3. 根據(jù)實驗結果進行條件優(yōu)化

1周

第4步

  1. 根據(jù)表達量放大表達純化
  2. 考核蛋白穩(wěn)定性

1周

第5步

  1. BALB/c小鼠免疫4-5針(每種蛋白免疫3只)
  2. 免疫前后尾血效價檢測
  3. 優(yōu)化篩選系統(tǒng)

2個月

 

第6步

  1. 細胞融合,HAT選擇培養(yǎng)
  2. 間接ELISA法篩選單克隆,有限稀釋法
  3. 單抗細胞株擴大穩(wěn)定培養(yǎng)

1-2個月

 

第7步

  1. 陽性單克隆細胞注入小鼠,制備腹水
  2. ProtienA/G純化單克隆抗體
  3. 抗體檢測性能驗證

1個月

已經(jīng)到最底了
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